實驗虹蚓抗菌腦的分離純化
來源：未知 |發布時間：2023-03-08 10:56|點擊:次
3-30KD虹蚓抗菌腦的分離純化及其抗菌效果的研究
1抗菌膚的研究進展
抗菌膚，是生物體受到外源性病原微生物侵害時，為清除體內突變細胞產生的一類小分多膚。對抗菌膚的研究興起于上個世紀80年代，瑞典科學家GBoman等人，用陰溝通桿菌和大腸桿菌刺激惜古比天蠶蛹誘導產生具有抗菌活性的物質，從其血淋巴分離后得到的抗菌小肚即為天蠶素，次年其氨基酸序列公布于《Nature》上，這是歷史上首次發現抗菌膚。隨后的研究表明，抗菌膚的分布十分廣泛，動物的免疫細胞、皮膚、組織器官、植物及微生物類生物均能提取到多種內源性抗菌膚，如防御素、蜂毒素、蛙皮素和對蝦素印等。
抗菌膚是由生物體內的特定基因編碼產生的一類有抗菌活性的小膚分子，其作用方式是通過結合細胞膜的相應靶位點形成孔道，造成細胞內物質泄漏失去電化學勢，最終導致細胞死亡，所以不易產生耐藥性，恤而對耐藥株的效果明顯，并且與目前流行使用的抗生素類物質不同的是它具有廣譜抗菌性，對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌、真菌、病毒、腫瘤等均有作用?？咕w對生物體內正常的真核細胞幾乎無損傷作用，僅與原核細胞與病變細胞發生作用。
現己經發現的抗菌膚己有750多種，這些抗菌膚分子氨基酸殘基含量大多在(13-50)之間，有個別分子可達到80個氨基酸殘基，其相對分子量均在4KD左右?？咕w有較為穩定的理化性質，天然抗菌膚通常是呈堿性的多膚，含有多個帶正電荷的氨基酸如賴氨酸或精氨酸,C端為疏水基團，N為親水基團，雙親的性質使之有較好的水溶性。大多數抗菌膚表現較強的陽離子特性，等電點大于7，并對大幅度離子強度和PH值變化有著較高的抗性，某些較新型的抗菌膚等電點甚至大于9。大部分抗菌膚的熱穩定性較好，100℃加熱15min扔能保持其本身活性不變性?？咕w還具有相對分子質量小、抗原性弱、低濃度并有快速殺菌等特點。因此，抗菌膚的發現和深入研究是開發全新一類的抗菌藥物新的曙光，利用抗菌膚解決目前傳統抗生素類藥物日益增強的耐藥作用己成為新的研究方向。
1.1抗菌膚的分類
因不同生物體的抗菌膚類型不同，所以抗菌膚具有復雜的多樣性及不同的分子結構，可根據生物源性的特點可將抗菌膚大致分為哺乳動物抗菌膚、兩棲類動物抗菌膚、水生物抗菌膚、昆蟲抗菌膚及植物抗菌膚等幾大類。
1.1.1哺乳動物抗菌膚
哺乳動物的抗菌膚分為防御素、cathelicidins和histatins三大類。
防御素根據氨基酸的數量、半膚氨酸的位置和不同的二硫鍵連接方式，可分為a-防御素、p一防御素和0一防御素三類。美國Lehrer實驗室首例從兔肺巨噬細胞中分離得到陽離子性極強的小分抗菌膚即a一防御素的一種，它主要存在于哺乳動物的中性粒細胞、巨噬細胞及動物小腸的上皮細胞內。最早的p一防御素是牛的氣管勃膜上皮細胞中發現的抗菌膚TAP，隨后在舌上皮細胞中發現的抗菌膚LAP同屬p一防御素，均由3個二硫鍵連接形成空間立體p一折疊結構，分子大小約為39-42個氨基酸殘基。隨后研究表明牛的中性粒細胞中含有13種p一防御素即BNBD1-13;水?；啬c內發現的p一防御素其氨基酸和核營酸序列與LAP相似。稱猴的中性粒細胞和單核細胞的顆粒能分離得到0一防御素，其結構呈環狀，是一類新型防御素，由18個氨基酸組成。與a一防御素和p一防御素不同的是，其分子結構為一個整圓環形。
作為哺乳動物抗菌膚的另一大類，Cathelicidins是以沒有活性前體存在于周邊中性粒細胞顆粒中，通過外界刺激激活細胞內的內源性彈性蛋白酶把成熟的膚從前膚中切割出來，此類抗菌膚最初是從豬的白細胞中分離得到的，其廣泛存在于豬、牛、羊、兔和馬的中性粒細胞中。人體內僅能分離出一種Cathelicidins即hCAP-18/LL-37。
從人體的唾液中分離出的一組富含組氨酸的陽離子小膚是抗菌膚的另一大家族histatin，相對分子質量僅為3000-4000.Histatin基本呈線性結構，具有殺細菌和真菌的活性，目前僅在人類與舊大陸猴體內分離得到。
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